LE SEXAGE

Alors maintenant, avec mes mutations plus nombreuses et surtout plus rares, je n'hésite plus à recourir à une méthode beaucoup plus professionnelle, le sexage ADN.

Sexage par ADN

De nombreuses espèces d’oiseaux exotiques sont sexuellement monomorphes : les mâles et les femelles ne sont pas morphologiquement différentiables. Le sexage par ADN est un outil efficace destiné à aider les éleveurs d’oiseaux dans le choix de leurs reproducteurs. Cette méthode repose sur le fait que les mâles et les femelles possèdent des chromosomes sexuels différents. Le déterminisme du sexe chez les oiseaux est inversé par rapport à l’espèce humaine : c’est le chromosome sexuel femelle qui détermine le sexe de l’oiseau. En effet, les femelles possèdent un chromosome Z et un chromosome W (ZW) alors que les mâles possèdent deux chromosomes Z (ZZ).

Concrètement, pour sexer un oiseau,
Etape 1 : Envoi de plumes (courrier classique) arrachées à l’oiseau.
Etape 2 : Réception des plumes et identification de chaque lot  selon un codage interne.
Etape 3 : Préparation à l’extraction d’ADN avec report du codage des plumes sur le matériel d’extraction.
Etape 4 : Extraction d'ADN : découpe de la base de la plume pour isoler le bulbe de l'ADN.
Etape 5 : Purification : isolation de l’ADN à tester par centrifugation (10 000 g) sur membrane de silicone.
Etape 6 : Amplification par PCR fluorescente (Polymerase Chain Reaction) de la séquence d’ADN portant l’information sur la nature du sexe de l’animal. Afin de différencier les deux sexes, on va amplifier, sur les chromosomes sexuels, des fragments de tailles différentes. Chez les mâles, un fragment du chromosome Z mesurant 372 paires de base est amplifiée. Pour les femelles, en plus de ce même fragment, on amplifie, sur le chromosome W cette fois, un fragment de 400 pb.
Etape 7 : Lecture des résultats à l’aide d’un séquenceur :
La fluorescence des fragments amplifiés est détectée par le séquenceur qui va les transformer en profils visibles à l’aide d’un logiciel adapté.
 

1. Les mâles ont des produits de PCR de taille identique : le profil montre un seul pic à 372 pb

1. Les femelles présentent des produits de PCR de deux tailles différentes : le profil donne deux pics     à 372 pb et 400 pb

Etape 8 : Edition des comptes-rendus d’analyses.
Etape 9 : Conservation de l’ADN à – 20°C pour la réalisation d’autres analyses.

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